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个人配资将标准品或待测样品加入微孔板孔中

一、产品概述

茁彩生物研发的肌肉生长抑制素（Myostatin，MSTN）ELISA 试剂盒，是一款专为精准定量检测生物样本中 MSTN 含量而设计的专业检测工具，适用于人、小鼠、大鼠等不同物种的血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清及其他生物液体样本。

MSTN 属于转化生长因子 -β（TGF-β）超家族成员，是一种主要在骨骼肌中表达的分泌型糖蛋白，对肌肉生长具有负调控作用。它通过抑制肌卫星细胞的增殖和分化，限制肌肉纤维的数量和大小，从而维持肌肉组织的稳态。在生理状态下，MSTN 的表达水平相对稳定，一旦其表达或活性异常，会导致肌肉发育异常。例如，MSTN 基因敲除的动物会出现肌肉过度增生的 “双肌” 表型；而在人类中，MSTN 基因突变可能与肌肉肥大症相关，相反，其高表达则可能与肌萎缩、恶病质等疾病有关。

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由于 MSTN 在肌肉代谢、运动医学、肌肉相关疾病（如肌营养不良、 sarcopenia ）以及畜牧业育种等领域的重要意义，精准检测其在生物样本中的含量，对于深入研究肌肉生长调控机制、探索相关疾病的发病机理、评估治疗效果以及改良畜禽品种等方面，都具有重要的科学价值和应用前景。

二、检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）原理。试剂盒中的微孔板预先包被有针对 MSTN 的特异性单克隆抗体（固相抗体）。检测时，将标准品或待测样品加入微孔板孔中，样品中的 MSTN 会与固相抗体特异性结合，形成 “固相抗体 - 抗原” 复合物。洗涤去除未结合的杂质后，加入生物素标记的抗 MSTN 二抗（检测抗体），该抗体与已结合在固相上的 MSTN 特异性结合，形成 “固相抗体 - 抗原 - 生物素化二抗” 复合物。再次洗涤后，加入亲和素 - 辣根过氧化物酶（HRP） conjugate，亲和素与生物素的高亲和力使 HRP 牢固结合在复合物上。随后加入底物四甲基联苯胺（TMB），在 HRP 的催化下，TMB 发生显色反应，生成蓝色产物。加入终止液（如 2M 硫酸）后，反应终止，蓝色转变为黄色。颜色深浅与样品中 MSTN 的含量呈正相关，通过酶标仪在 450nm 波长处测定吸光度（OD 值），并与标准曲线对比，即可计算出样品中 MSTN 的浓度。

三、操作步骤

试剂准备：将试剂盒从 2-8℃冰箱取出，置于室温（20-25℃）平衡 30 分钟。按说明书要求稀释浓缩洗涤液（通常用蒸馏水或去离子水稀释 20 倍），并准备好标准品、样品稀释液、生物素标记二抗、亲和素 - HRP、底物 TMB、终止液等试剂。注意：标准品、生物素二抗、亲和素 - HRP 等试剂使用前需短暂离心，确保试剂集中在管底。标准曲线制备：将冻干标准品用标准品稀释液复溶后，进行梯度稀释，通常设置 6-8 个浓度梯度（如 0ng/mL、0.156ng/mL、0.312ng/mL、0.625ng/mL、1.25ng/mL、2.5ng/mL、5ng/mL、10ng/mL），具体浓度范围根据试剂盒说明书调整。每个浓度设 2-3 个复孔，以提高结果可靠性。样品处理：血清 / 血浆：血清需自然凝固后离心（3000×g，10 分钟）取上清；血浆应使用合适抗凝剂（如 EDTA、肝素）收集，离心后取上清。避免溶血，若不能立即检测，需分装后 - 20℃或 - 80℃冻存，避免反复冻融。组织匀浆：取新鲜肌肉或其他组织，用预冷 PBS 冲洗后剪碎，按重量体积比加入预冷匀浆缓冲液（含蛋白酶抑制剂），冰浴匀浆，4℃离心（12000×g，20 分钟）取上清。细胞培养上清：直接离心（3000×g，5 分钟）去除细胞碎片后使用；细胞裂解液需用适当裂解液处理细胞，离心取上清。所有样品均需用样品稀释液按适当比例稀释，确保浓度在标准曲线范围内。加样：向微孔板各孔中分别加入 100μL 标准品、稀释后的样品或空白对照（样品稀释液），轻轻振荡混匀，盖上封板膜，37℃孵育 30-60 分钟（具体时间按说明书）。洗涤：弃去孔内液体，拍干，每孔加 300-400μL 洗涤液，静置 1-2 分钟后弃去，重复洗涤 3-5 次，最后一次拍干确保无残留液体。加生物素标记二抗：每孔加入 100μL 生物素标记的抗 MSTN 二抗工作液，盖封板膜，37℃孵育 30 分钟。洗涤：重复步骤 5 的洗涤操作。加亲和素 - HRP：每孔加入 100μL 亲和素 - HRP 工作液，盖封板膜，37℃孵育 30 分钟。洗涤：再次重复步骤 5 的洗涤操作，确保彻底去除未结合的 HRP。显色：每孔加入 100μL TMB 底物溶液，避光 37℃孵育 10-20 分钟（观察到标准品孔出现明显梯度蓝色即可终止）。终止反应：每孔加入 50μL 终止液，轻轻振荡，溶液立即由蓝变黄。读数：在终止后 30 分钟内，用酶标仪在 450nm 波长（参考波长 630nm）测定各孔 OD 值。

四、产品优势

高特异性：采用高亲和力的单克隆抗体，经严格筛选验证，与其他 TGF-β 家族成员及相关蛋白无交叉反应，确保检测结果的特异性。高灵敏度：检测下限低至 pg/mL 级别（如 0.08ng/mL 或更低），可精准检测低浓度样本中的 MSTN，满足微量分析需求。宽检测范围：标准曲线覆盖 0.156-10ng/mL（或更宽范围），适用于不同来源、不同生理病理状态下的样本检测，减少稀释操作带来的误差。良好重复性：批内变异系数（CV）＜8%，批间变异系数（CV）＜10%，保证实验结果的稳定性和可靠性，适合多批次实验或不同实验室间的数据对比。操作便捷：试剂盒提供完整试剂和详细说明书，步骤标准化，无需复杂设备，普通实验室即可完成，且检测周期短（约 3-4 小时），适合批量样本处理。

五、注意事项

试剂保存：未开封试剂盒于 2-8℃避光保存，避免冷冻；开封后剩余试剂需按说明书要求保存（如生物素二抗、亲和素 - HRP 于 - 20℃分装保存），并在有效期内使用。样品处理：样品采集后应尽快检测，避免反复冻融（建议分装保存）；组织匀浆和细胞裂解需在冰浴中进行，加入蛋白酶抑制剂防止 MSTN 降解；溶血或脂血样品可能干扰检测，需预处理或避免使用。操作规范：加样时使用校准过的移液器，避免气泡；洗涤步骤需彻底，确保去除未结合物质，否则易导致背景升高；显色时间需严格控制，避免过短或过长影响结果线性。结果分析：标准曲线相关系数（R²）应≥0.98，若样品 OD 值超出标准曲线范围，需调整稀释倍数重测；实验需设置空白对照和复孔，结果取平均值以减少误差；异常结果需结合样本背景和实验条件综合判断，必要时重复验证。

茁彩生物的 MSTN ELISA 试剂盒为肌肉生长调控研究、相关疾病诊断及药物研发提供了可靠的检测手段，助力科研人员高效获取精准的 MSTN 定量数据，推动相关领域的研究进展。

发布于：上海市

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